换一批含信号肽的Mtb8.4/hIL12嵌合基因真核表达质粒的构建及在COS-7细胞中的表达
CONSTRUCTION OF THE CHIMERIC MS/hIL12 EUKARYOTIC EXPRESSION PLASMID AND ITS EXPRESSION IN COS-7 CELL
摘要[目的]克隆结核分枝杆菌含信号肽的Mtb8.4(MS)/hiL12嵌合基因,导入真核表达载体pCI-neo,并在COS-7细胞中进行表达.[方法]首先以pcDNA3.1(十)-含信号肽的Mtb8.4(pMS)为模板,经聚分酶链反应(PCR)扩增出MS-linker基因,与pCI-neo载体进行连接重组,构建成pCI-neo-MS-linker(pMSL)重组质粒,然后以pORF-hIL12质粒为模板,经PCR扩增出hIL-12基因,将hIL-12基因与pMSL质粒进行连接重组,构建成MS/hIL12嵌合基因真核表达质粒,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定:重组嵌台质粒转染COS-7细胞后,用RT-PCR方法鉴定MS/hIL12嵌合基因在转录水平的表达情况.[结果]MS/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒经证实构建成功;转染COS-7细胞后,MS/hIL12嵌合基因在转录水平成功表达.[结论]MS/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒的成功构建及在COS-7细胞中的成功表达,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病MS/hIL12嵌合基因疫苗奠定了基础.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1003-8507.2007.17.011
发布时间
2007-11-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
四川省重点学科建设项目（2002]1;SZD0241）
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