摘要目的 通过对体外诱导产生和临床分离的氟喹诺酮类耐药结核分枝杆菌进行全基因组测序,从基因水平上探索结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制.方法 在体外采用药物浓度梯度诱导法,在罗氏培养基上将结核分枝杆菌标准菌株H37Rv诱导成标准耐左氧氟沙星的菌株及高水平耐药菌株,收集并保存各代的诱导菌株及无药对照菌株.筛选临床分离株中的氟喹诺酮类耐药菌株,并用液体微孔板法对上述诱导菌株和临床分离菌株进行14种抗结核药物敏感性检测,然后进行全基因组测序及分析.结果 对左氧氟沙星耐药结核分枝杆菌模型进行分析发现,结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物产生耐药性可能与 gyrB(Ala504Thr,Asp461 Asn)、gyrA(Ala90Val)、PE_PGRS31(Ala395fs)、panB(Asp184_Ala187del)、aroD(Asp61Asn)、devS(Gly348Arg)和 rv3446c(Ala178Thr)基因突变有关;临床分离菌株全基因组关联分析检测到17个可能与氟喹诺酮类药物耐药相关的新突变位点,分别为gyrA(p.Glu21Gln,p.Gly668Asp,p.Ser95Thr,p.Glu213Asp,p.His280Arg,p.Ala384Val)、gyrB(er132Ala,p.Met291Ile)、PE_PGRS31(p.Ser365Phe,p.Pro254Leu,p.Thr252Ile,p.Val352Ile)、rv3446c(p.Arg284Pro,p.Leu389Phe,p.Ala164Val)和 devS(p.Val307Ala,p.Ile283Thr).结论 本研究构建的左氧氟沙星耐药结核分枝杆菌模型为探索结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制提供了理想的生物模型;全基因组测序从基因水平上分析了结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制,所得与氟喹诺酮类药物耐药相关的新突变位点仍需进一步的研究与验证.