一种新的抗生素联合用药方案清除细胞支原体污染的研究

A new combination of antibiotics treatment for cellular mycoplasma contamination

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摘要目的支原体污染是细胞培养过程中最为常见也较为棘手的问题,因此,解决细胞支原体污染问题存在必要性和迫切性.但是目前可用的商品化去除支原体试剂选择少,价格贵,本研究拟探索一种操作简单,成本低且去除支原体效果佳的抗生素联合用药方案.方法选取四种抗生素药物联合用药:红霉素、氯霉素、泰乐菌素和环丙沙星,连续12天处理培养支原体污染的C3A肝癌细胞.首先通过倒置显微镜观察加药处理后,C3A细胞内颗粒、形态等变化;加药处理C3A细胞后通过CCK-8法检测其活率.其次,进行支原体聚合酶链式反应(PCR)检测和荧光染色,评价抗生素联合用药方案去除支原体的有效性.最后,实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测C3A细胞主要功能基因角蛋白(CK18)、白蛋白(ALB)、氨甲酰磷酸合成酶1(CPS1)和细胞色素P450酶系1A2(CYP1A2)等功能基因的表达恢复情况.结果经抗生素联合用药处理后,细胞形态更为规整,胞内颗粒显著减少,形态透亮折光度增强等特征变化,对C3A细胞活率无明显影响,抗生素联合用药组PCR电泳结果显示没有支原体DNA条带,同时荧光结果表明没有出现其余点状或者串点的支原体荧光,支原体去除后功能基因CK18、ALB、CPS1和CYP1A2相对表达量均升高.结论新的抗生素联合用药方案能够达到支原体去除效果,C3A细胞活率维持较好,去除支原体后细胞主要功能基因表达可得到恢复提升.