基于转录组测序分析芹菜素抑制巨噬细胞焦亡的潜在作用机制
The potential mechanism of apigenin inhibits macrophage pyroptosis based on transcriptome sequencing
摘要目的 探讨芹菜素对巨噬细胞焦亡的影响及机制.方法 体外培养THP-1细胞,应用佛波酯将其诱导分化为巨噬细胞,以脂多糖(LPS)和尼日利亚菌素联合刺激诱导巨噬细胞焦亡.通过光学显微镜观察细胞形态,采用 Western blot检测Gasdermin D-N(GSDMD-N)蛋白的表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NLRP3、IL-1β和TNF-α mRNA的表达,探讨芹菜素对巨噬细胞焦亡的影响.进一步使用转录组测序方法筛选差异表达基因和信号通路.最后应用qRT-PCR验证5.8S rRNA、18S rRNA、28S rRNA、Pre-45S rRNA及POP1、NAT10、RCL1和GAR1相关基因的表达,探讨核糖体生物合成信号通路在芹菜素抑制巨噬细胞焦亡中的作用.结果 芹菜素预处理能够抑制巨噬细胞焦亡中气泡状突出物的形成,减少GSD-MD-N蛋白和NLRP3、IL-1β、TNF-α mRNA的表达.基因本体(GO)富集分析结果显示芹菜素主要参与核酸代谢过程、RNA代谢过程和转录调节活性等功能,京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析结果显示芹菜素主要参与核糖体生物合成、NOD样受体和Toll样受体等细胞焦亡相关信号通路.qRT-PCR验证显示,芹菜素预处理能够显著减少 5.8S rRNA、18S rRNA、28S rRNA、Pre-45S rRNA 及 RCL1、GAR1、POP1 和 NAT 10 相关基因的表达.结论 芹菜素对巨噬细胞焦亡具有抑制作用,其机制可能与抑制核糖体生物合成信号通路有关.
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