益气血法调节GDF9、c-IAP1/2、JNK1/2、TNFR1/2表达对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响
Effects of decoction for tonifying and replenishing Qi and blood on ovarian granulosa cells apoptosis of controlled ovarian hyperstimulation rats via regulating the expressions of GDF9,c-IAP1/2,JNK1/2,TNFR1/2
摘要目的 观察益气血法经后增殖方含药血清基于p38 MAPK/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路调节生长分化因子9(GDF9)、细胞凋亡抑制蛋白1/2(c-IAP1/2)、c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)、肿瘤坏死因子受体1/2(TNFR1/2)表达对控制性超排卵大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法 取12 只雌性大鼠,随机分为控制性超排卵+中药组(6 只大鼠给予经后增殖方4.5 g/kg灌胃)和控制性超排卵组(6 只大鼠给予等体积生理盐水灌胃),后续经腹腔注射醋酸曲普瑞林、孕马血清促性腺激素、HCG后,取 2 组大鼠腹主动脉血制备含药血清和空白血清.另取 15只雌性大鼠,经腹腔注射醋酸曲普瑞林、孕马血清促性腺激素、HCG后,收集卵巢颗粒细胞,分别与空白血清(空白血清组)、含药血清(含药血清组)、含药血清+GDF9 抗体(含药血清+GDF9 抗体组)在体外共同培养.TUNEL检测卵巢颗粒细胞凋亡率,qRT-PCR法检测卵巢颗粒细胞中p38 MAPK、NF-κB、GDF9、c-IAP1、c-IAP2、JNK1、JNK2、TNFR1、TNFR2 mRNA 表达情况,Western blot法检测卵巢颗粒细胞中GDF9 蛋白表达情况.结果 含药血清组和含药血清+GDF9 抗体组细胞凋亡率均明显低于空白血清组(P均<0.05),且含药血清组明显低于含药血清+GDF9 抗体组(P<0.05).含药血清组p38 MAPK、NF-κB mRNA相对表达量均明显低于空白血清组(P均<0.05).含药血清组和含药血清+GDF9 抗体组 c-IAP1、c-IAP2、GDF9 mRNA 相对表达量和GDF9 蛋白相对表达量均明显高于空白血清组(P均<0.05),且含药血清组均明显高于含药血清+GDF9 抗体组(P均<0.05);含药血清组和含药血清+GDF9 抗体组JNK1、JNK2、TNFR1、TNFR2 mRNA相对表达量均明显低于空白血清组(P均<0.05),且含药血清组均明显低于含药血清+GDF9 抗体组(P均<0.05).结论 益气血法经后增殖方可通过调控p38 MAPK/NF-κB信号通路,上调控制性超排卵大鼠卵巢颗粒细胞中GDF9、c-IAP1、c-IAP2 的表达,下调JNK1、JNK2、TN-FR1、TNFR2 的表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡.
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