换一批家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因热点突变Taqman MGB探针检测方法的建立及应用
Establishment of Taqman MGB probe for detection of low-density lipoprotein receptor gene hot spot mutation in familial hypercholesterolemia patients
摘要目的:建立Taqman MGB探针实时荧光定量PCR检测家族性高胆固醇血症(FH)患者低密度脂蛋白受体(LDLR)基因热点突变的简便方法.方法:①入选94例临床确诊FH患者为研究对象,30例健康人作为阴性对照及明确存在LDLR基因热点突变W462X、A606T和D601Y的FH患者各1例作为阳性对照,分别提取外周血DNA;②应用Primer Premier v3.0软件设计3个热点突变的特异性引物和Taqman MGB探针;③运用Taqman探针实时荧光定量PCR方法,对3例阳性对照及30例健康对照进行检测,检验方法的准确性;④同法检测94例确诊FH患者的基因组DNA;⑤运用Touch-down PCR方法对发现突变患者进行一代测序验证.结果:①3例阳性对照均检测到相应突变,30例健康对照均未检测到突变,证实此方法能够准确检测到基因突变位点;②94例确诊FH患者中发现13例W462X、3例A606T、1例D601Y,初步计算3个热点突变约占全部FH患者的18.1％;③对发现突变的17例患者进行一代测序验证,结果完全一致.结论:成功建立Taqman MGB探针实时荧光定量PCR方法,为FH患者LDLR基因热点突变的检测提供了快速可靠的技术手段.
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关键词
家族性高胆固醇血症LDLR基因热点突变Taqman探针Familial hypercholesterolemiaLow-density lipoprotein receptor geneHot spot mutationTaqman probe
医学主题词
突变(Mutation)基因(Genes)方法(Methods)高胆固醇血症Ⅱ型(Hyperlipoproteinemia Type II)受体, 脂蛋白(Receptors, Lipoprotein)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-5062.2017.02.014
发布时间
2017-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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