换一批
换一批新生大鼠右心室心肌细胞的原代培养及鉴定
Isolation and primary culture of right ventricular cardiomyocytes from neonatal rats
摘要目的:建立一种简便、重复性好的新生大鼠右心室心肌细胞原代培养方法,为右心疾病及肺循环右心相关研究提供可靠的细胞工具.方法:采用出生1～3d无特定病原体级,SD新生大鼠12只,无菌操作开胸取心脏后,在体视显微镜下分离右心室,用胰蛋白酶与Ⅱ型胶原酶联合消化法消化右心室心肌组织,差速贴壁法纯化右心室心肌细胞.用0.4％台盼蓝染色检测右心室心肌细胞存活率,在倒置显微镜下观察右心室心肌细胞的生长特点并记录细胞搏动频率.利用cTnT对右心室心肌细胞进行免疫荧光染色鉴定细胞纯度.结果:采用胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶联合消化右心室心肌组织及差速贴壁法分离所得右心室心肌细胞存活率为(94.96±2.13)％.培养的心肌细胞24h大部分贴壁并伸出伪足,少数细胞出现自发性搏动;48 h后细胞基本全部贴壁,伪足延长,出现局部同步化搏动;72 h后细胞伪足继续延长并形成细胞簇,搏动基本同步化;96 h后细胞连接成片,呈现完全同步化搏动,搏动频率为(121.2±10.7)次/min.用cTnT染色培养的细胞纯度达(96.71±2.66)％.结论:体视显微镜下分离右心室结合复合酶消化法能成功培养出纯度高、功能较好的新生SD大鼠右心室心肌细胞.
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分类号
R54
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-5062.2019.09.015
发布时间
2019-11-07
基金项目
国家自然科学基金青年项目（81800061、81700048）；
国家自然科学基金重点项目（81630004）；
广东省科技计划项目公益研究与能力建设专项（2017A020215114）；
广东省自然科学基金-自由申请项目（2016A030313606）；
广州市教育局市属高校科研项目(青年项目)（1201630095）；
广州医科大学附属第一医院青年基金项目（201517-gyfyy）；
呼吸疾病国家重点实验室自主课题青年项目（SKLRD-QN-201704）；
广东省自然科学基金博士启动项目（2017A030310552）
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