摘要目的 探究皮肤角质形成细胞Wnt5a通过靶向调控基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP9)的表达参与复杂区域疼痛综合征(complex regional pain syndrome,CRPS)-Ⅰ型外周敏化的机制,寻找该慢性疼痛的潜在治疗策略.方法 本研究分为两部分,第一部分为体外实验.体外培养人永生化角质形成细胞HaCaT进行氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)处理,初步观察OGD/R早期(24h内)线粒体损伤及膜电位变化,并探究给予不同浓度Wnt5a抑制剂Box5对MMP9的影响.第二部分为动物实验.将大鼠随机分为慢性缺血后疼痛(chronic postischemia pain,CPIP)组、Box5(20)组、Box5(40)组和对照组,每组 8 只,CPIP 组、Box5(20)组、Box5(40)组先建立大鼠患肢缺血再灌注CPIP模型,模拟CRPS-Ⅰ型病理生理过程,Box5(20)组和Box5(40)组在此基础上分别足底注射20 μmol/L和40 μmol/L Box5溶液100 μL,对照组和CPIP组则分别注射生理盐水100 μL.通过疼痛行为学测定观察4组大鼠2周内不同时间点(D1,D2,D4,D10,D14)机械痛和热痛阈值变化情况.HE染色观察大鼠皮肤炎症浸润及角化情况,免疫荧光染色观察4组MMP9的表达情况,ELISA检测4组背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的IL-1β及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平.结果 体外实验:HaCaT细胞进行OGD/R处理后,MMP9 平均荧光强度显著增加(P＜0.001);透射电镜下观察到OGD/R组出现线粒体明显萎缩,线粒体膜电位检测显示,与对照组相比,OGD/R组提示线粒体膜电位下降明显(P=0.027).动物实验:与OGD/R组相比,仅Box5(40)组线粒体膜电位上升具有统计学差异(P=0.046).行为学检测发现CPIP组大鼠术后各时间点(D1,D2,D4,D10,D14)机械痛阈值和热痛阈值均显著降低(P均＜0.05).HE染色提示CPIP组大鼠患足真皮层出现大量炎症细胞浸润,表皮出现过度角化,颗粒层及棘层厚度显著增加(P＜0.001).免疫荧光试验显示,CPIP组角质形成细胞MMP9荧光强度显著增加(P＜0.001);与CPIP组相比,Box5(20)组(P=0.002)和Box5(40)组(P＜0.001)MMP9 荧光强度均显著下降.ELISA检测结果显示,CPIP组IL-1β(P=0.048)和TNF-α浓度(P=0.002)显著升高;与CPIP 组相比,Box5(40)组IL-1β(P=0.047)和TNF-α浓度(P=0.047)显著下降.结论 外周局部缺血再灌注损伤可导致角质形成细胞MMP9 过度表达,引起CRPS-Ⅰ型外周敏化.靶向抑制Wnt5a/MMP9可逆转CPIP大鼠疼痛行为,为临床治疗慢性痛提供了参考依据.