换一批边缘革蜱Dm86基因表达及免疫原性分析
Expression of Dm86 Gene of Dermacenter Marginatus and Analysis of Immunogenicity
摘要[目的]研究Bm86同系物Dm86基因及其编码蛋白,为抗边缘革蜱疫苗候选抗原提供基础.[方法]以边缘革蜱饱血雌蜱cDNA为模板扩增克隆Dm86基因,分析生物学特性及生活史各阶段表达水平,截短基因构建重组质粒,经IPTG诱导后SDS-PAGE鉴定,纯化蛋白,制备多克隆抗体进行Western Blotting鉴定.[结果]PCR扩增获得了1773 bp目的片段,Dm86蛋白由591个氨基酸组成,分子量为64857.81,理论等电点为6.78,酸性,具有不稳定性、亲水性和多个B细胞抗原表位;Dm86基因在边缘革蜱不同阶段均有不同程度的表达,饱血蜱阶段的表达量较高;重组蛋白大小为39kDa,以包涵体形式表达;抗体效价可达1:25600,能够识别重组蛋白.[结论]Dm86重组蛋白具有一定的反应原性和免疫原性.
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