SOX7基因慢病毒载体的构建及其在缺氧条件下对HUVECs增殖与迁移功能的影响
Construction of SRY-box transcription factor 7(SOX7)lentiviral plasmid and its effects on proliferation and migration of HUVECs under hypoxia
摘要目的 构建过表达SRY-box transcription factor 7(SOX7)基因的慢病毒载体,建立SOX7基因过表达的人脐静脉内皮细胞株(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),并在常氧和缺氧条件下探究过表达SOX7对HUVECs迁移和增殖能力的影响.方法 使用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术扩增SOX7基因,通过同源重组法构建以pHAGE-CMV-MCS-IRES-ZsGreen 为载体的 SOX7-pHAGE 重组质粒.实时荧光定量 PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)和免疫印迹(Western blot)法检测目的基因的mRNA和蛋白表达.将SOX7-pHAGE重组质粒和包装质粒共转染293T细胞,获得含有SOX7-pHAGE慢病毒悬液,经浓缩后感染HUVECs,构建SOX 7稳定感染细胞株.应用qPCR和 Western blot技术检测SOX7基因的mRNA和蛋白的表达.在常氧及缺氧条件下,通过细胞划痕实验和CCK-8法检测过表达SOX7对HUVECs迁移和增殖能力的影响.结果 SOX7-pHAGE重组质粒经测序后,序列比对正确.qPCR和 Western blot法成功检测出SOX7-pHAGE重组质粒转染的293T细胞在mRNA水平过表达约111.4倍(P=0.002 8),在蛋白质水平上出现过表达条带;qPCR和Western blot技术成功检测到SOX7-pHAGE慢病毒感染的HUVECs在mRNA水平上显著升高约68.2倍(P=0.003 0),在蛋白水平上显著升高约1.7倍(P=0.004 3),SOX7-pHAGE重组质粒及SOX7稳定感染细胞株构建成功.在常氧条件下,SOX7稳定感染细胞株的迁移能力没有发生改变(P>0.999 9),而在缺氧条件下其迁移能力增强约1.2倍(P=0.004 4).在常氧条件下,SOX7稳定感染细胞株的增殖能力增强约1.3倍(P=0.008 7),在缺氧条件下其增殖能力也显著增强约1.4倍(P=0.022 8).结论 SOX7稳定感染细胞株可促进HUVECs的增殖能力.在缺氧条件下,SOX7稳定感染细胞株可回补HUVECs被抑制的迁移和增殖能力.
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