换一批
换一批重组人转化生长因子β1在CHO/dhfr-细胞中的稳定表达和纯化
Expression, Purification and Bioactivity Assay of Recombinant Human Transforming Growth Factor-β1 in CHO/dhfr-Cell
摘要构建了含重组人转化生长因子β1(rh TGF-β1)基因的真核表达载体,并利用阳离子脂质体介导的方法,将构建的表达载体转染到二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型哺乳动物细胞CHO/dhfr-中,通过氨甲喋呤(MTX)加压筛选获得稳定表达重组人转化生长因子β1的细胞株.于14 L细胞发酵罐进行扩大培养,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测得表达量在3 mg/L左右.采用亲和层析、反相层析及分子筛凝胶层析的方法分离纯化,获得的rhTGF-β1试制品的纯度大于97％,得率在25％以上.通过基质辅助激光解析电离化飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)测定rhTGF-β1的分子量为25.470 ku,与理论分子量一致.N端蛋白序列分析仪分析其N端氨基酸序列,与理论的氨基酸序列一致.rhTGF-β1具有抑制水貂肺上皮细胞Mv-1-Lu增殖的活性,测定其比活为3.2×107 IU/mg,与商品化的rhTGF-β1标准品相当.本研究为进一步规模化制备rh TGF-β1奠定了基础.
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