换一批Tm值差异型不对称PCR方法的建立及其在分子诊断中的应用
Establishment of the Tm Difference Asymmetric PCR Method and Its Application in Molecular Diagnosis
摘要多数分子诊断方法对靶基因的检测都是以单链 DNA 为基础的,如何获得大量和高质量的单链靶 DNA 分子一直是研究热点。以包含BRCA1基因上3个单核苷酸多态性(SNP)的 DNA 片段为研究对象,通过调整不对称扩增引物碱基序列组成(5'-端引入错配或加入锁核苷酸(locked nucleic acid,LNA)),使用相差10倍浓度来增加不对称引物间Tm值差异,改进扩增条件(添加增强剂的扩增缓冲液,不同退火温度的二阶循环扩增程序)后,进行不对称扩增来产生大量单链靶DNA产物。结果表明Tm差异型不对称 PCR(Tm difference asymmetric PCR,TDA-PCR)可有效提高单链DNA分子产率,降低引物设计难度,也扩大了模板序列的适用范围。此外,还针对禽流感病毒 H5N1的血凝素(haemag-glutinin)HA基因保守序列进行不对称扩增,用获得的单链DNA为模板进行焦磷酸测序检测,所得结果与参考序列一致且无明显干扰信号。因此,采用Tm值差异型不对称PCR可使焦磷酸测序等分子诊断流程更为简便,成本更低,效率更高,具有很好的通用性和实用性。
更多相关知识
关键词
Tm值差异型不对称PCR单链DNA模板单核苷酸多态性焦磷酸测序禽流感病毒Tm difference asymmetric PCR (TDA-PCR)single-stranded DNA templatesingle nucleotide polymorphismpyrose-quencingAvian influenza virus
分类号
Q755（分子遗传学）
栏目名称
DOI
10.6043/j.issn.0438-0479.201506017
发布时间
2016-08-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31200979,81271691,82170734,30973591）
国家国际科技合作专项基金（2011DFG33320）
福建省自然科学基金（2016Y0063）
江苏省基础研究计划自然科学研究项目（BK20151445）
中国博士后科学基金（2012M512179,2013T6092）
中国博士后科学基金特别资助项目（2013T60962）
药物质量与安全预警教育部重点实验室项目（MKLDP2013MS01）
中央高校基本科研业务费专项（ZQN-PY319,2015ZD008）
华侨大学高层次人才启动项目（09BS624）
- 浏览0
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
