5匹马外周血单个核细胞表达MHC-Ⅰ类分子的差异分析

Analyisis of Classical MHC Class Ⅰ Alleles Expressed by Peripheral Blood Mononuclear Cells from 5 Horses in Heilongjiang Province

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摘要基于RT-PCR方法,扩增了用于马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)减毒疫苗株CTL表位研究的5匹马的编码经典MHC-Ⅰ类分子的大部分基因,具体包括编码肽结合区大部分区域、α3区、穿膜区及胞浆区蛋白的基因,并进行了PCR产物的克隆和测序.试验马匹外周血单个核细胞(Peripheral blood mono-nuclear cells,PBMC)的总RNA提取物经RT-PCR扩增,并将所得产物进行T-A克隆.从每匹马的所有克隆中,分别随机挑取鉴定为阳性重组质粒的21～23个克隆用于测序分析.研究结果表明,5匹试验马匹各自具有3～5个等位基因,由于MHC-Ⅰ分子等位基因表达的共显性特征,可以推测马的基因组内可能存在2～3个基因座对应于这些等位基因,这与国外已有研究结论基本一致.另外,不同马匹PBMC表达的MHC-Ⅰ类分子的差别水平不一致.除了6号与7号和10号马之间MHC-Ⅰ类分子的差异较大,无相同或高度相近的经典MHC-Ⅰ类分子序列外,各马匹间均表达具有1个或1个以上的相同或高度同源的对应经典的MHC-Ⅰ类分子的mRNA.以上研究结果既可作为正在开展的EIAV减毒疫苗株CTL表位研究的基础性、支持性数据,又可进一步丰富国内马的经典MHC-Ⅰ分子多态性方面的相关研究.