换一批牛白血病病毒env(gp51)基因的克隆和原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
Cloning and Prokaryotic Expression of Bovine Leukemia Virus env(gp51) Gene and Development of an Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Detecting Antibody against Bovine Leukemia Virus
摘要从持续感染牛白血病病毒(BLV)的羊胎肾细胞(FLK-BLV)中提取前病毒DNA,用PCR方法扩增编码牛白血病病毒gp51蛋白的env(gp51)基因,序列测定结果表明扩增片段全长828 bp.将扩增基因插入原核表达载体pET-32a构建pET-32a-gp51重组质粒,转化BL21(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明重组融合蛋白大小约为43 000,Western-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性.以纯化的重组蛋白gp51作为抗原,建立检测BLV抗体的间接ELISA诊断方法.结果表明,抗原gp51的最佳包被浓度为2.19μg·mL-1,血清的最佳稀释倍数为1:80,阳性判定标准确定为样品OD450nm大于0.451.用该方法对12份参考血清进行检测,准确率为91.67%.
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DOI
10.3321/j.issn:0366-6964.2009.04.014
发布时间
2009-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江苏出入境检验检疫局科研项目（2005KJ01）
湖北省武汉市科技攻关计划（20022002062）
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