猪札幌病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用
Development and Preliminary Application of TaqMan Fluorescence Quantitative RT-PCR Assay for Detection of Porcine Sapovirus
摘要根据猪札幌病毒(Porcine Sapovirus,SaV)的VP1保守基因序列设计引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法,并与常规RT-PCR检测方法进行了比较.结果表明,荧光定量RT-PCR方法的检测灵敏度可达16.1拷贝·μL~(-1),而常规RT-PCR方法的灵敏度为1.61×10~3拷贝·μL~(-1).对216份粪样的检测结果进一步表明该法(检出4份)比常规RT-PCR方法(检出3份)的灵敏度高.系统进化分析表明,该4株病毒均为GⅢ型,与SaV上海分离株(FJ387164)同源性为100%.该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点,适合于猪SaV感染的流行病学调查和临床诊断.
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