换一批摘要本研究旨在克隆猪细胞周期蛋白A基因(Cyclin A),并在猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC)中表达,以验证其功能.以人的Cyclin A基因为信息探针,经电子克隆得到猪Cyclin A基因,通过RT-PCR和DNA测序验证电子克隆结果并对其作生物信息学分析,用RT-PCR、Western blot研究它在SUVEC中的表达情况.应用激光共聚焦显微镜分析它在细胞中的亚细胞定位,并通过流式细胞仪分析细胞周期以及用MTS法测定细胞的增殖能力.结果如下:核酸测序证明RT-PCR产物同电子克隆结果相符.该cDNA包含1 299 bp的完整开放阅读框(ORF),共编码432个氨基酸,经NCBI BLAST分析,该基因定位于猪的8号染色体上.Western blot结果显示Cyclin A基因编码蛋白的相对分子质量大小约为40 ku,亚细胞定位研究表明该蛋白定位于细胞核中.经流式细胞仪分析表明稳定表达该基因的细胞,其G_1期的细胞数量比对照组细胞增加了15%～20%,而S期的细胞数量比对照组细胞减少了约18%;MTS法检测显示细胞株SUVEC-CycAGFP的增殖活性明显高于对照组细胞.作者成功克隆到新基因猪源细胞周期蛋白A,并验证了其生物学功能,为今后开展病毒感染对猪细胞周期蛋白A影响的研究奠定了基础.
更多相关知识
关键词
猪细胞周期蛋白A基因克隆猪脐静脉血管内皮细胞真核表达细胞周期MTSCyclin A gene of pigcloningswine umbilicus veins endothelial celleukaryotic expressioncell cycleMTS
栏目名称
发布时间
2010-06-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30972186）
- 浏览4
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
