换一批
换一批p21基因在牛卵成熟中的表达检测及其真核表达载体构建
Detection for p21 Gene Expression in Bovine Oocytes Maturation and Construction of Eukaryotic Expression Vector pVenus-P21
摘要本研究旨在检测p21基因在牛卵成熟过程中的表达,并构建其真核表达载体.首先利用RT-PCR和免疫荧光染色对不同成熟阶段牛卵内p21的mRNA和蛋白表达进行检测.然后从牛成纤维细胞中克隆了p21基因并构建pVenus-P21真核表达载体.经脂质体2000介导重组质粒pVenus-P21转染Hela细胞,通过荧光显微镜观察、RT-PCR检测,确认重组质粒在Hela细胞内的表达及定位.最后应用体外转录试剂盒将p21-venus体外转录为cRNA,并注射牛卵母细胞,荧光显微镜下观察其表达及定位.结果显示,在牛卵体外成熟过程中,各时期均存在p21基因mRNA及蛋白的表达.构建的真核表达载体pVenus-P21能够在Hela细胞中正确表达及定位.p21-ve-nus cRNA显微注射牛卵后其融合蛋白也能实现准确定位,为研究P21在卵母细胞成熟以及胚胎发育过程中的作用奠定了基础.
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