换一批禽波纳病毒分离鉴定及其恒温扩增检测分析
Isolation and Rapid Detection of Avian Borna Virus by a Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification Assay for Outbreaks in Psittacine Birds
摘要利用腺胃扩张症(PDD)患病鹦鹉腺胃RT-PCR阳性病料,接种猪睾丸(ST)传代细胞,分离禽波纳病毒(ABV),建立实时RT-LAMP检测方法.将阳性病料接种ST细胞单层传代,出现细胞圆缩、脱落,ABV基质蛋白(M)基因扩增产物出现预计大小351 bp条带,测序后进化树分析显示为ABV5基因型.针对M基因设计ID37、ID30、ID19、ID6和ID1共5组引物,后3组引物RT-LAMP呈阳性反应.利用钙黄绿素建立实时RT-LAMP,分别在36(ID30)、38(ID37)和49(ID19)min出现扩增反应曲线,60 min内扩增达到峰值.对各种临床样品检测与RT-PCR结果一致,新城疫等类症病毒未见阳性反应,显示较高的特异性 ;对细胞培养物检测10-1～10-5为阳性,比较RT-PCR敏感性提高约100倍.RT-LAMP检测方法的建立为PDD防制提供新的检测方法,也是波纳病公共卫生研究有益的参考.
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