换一批检测施马伦贝格病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法
A Real-time Quantitative Reverse Transcription-PCR for the Detection of Schmallenberg Virus Nucleic Acid
摘要根据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因节段设计一对引物和TaqMan探针,建立了检测SBV核酸的荧光定量RT-PCR方法.通过优化反应体系和反应条件,该方法对101～107半数组织培养感染量(TCID50)的SBV核酸呈现良好的线性关系.利用德国FLI制备和保存的SBV核酸阳性(n=140)、SBV核酸阴性(n=132)和辛波血清群相关病毒核酸样品(n=16),对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了验证.结果表明,所建立方法与FLI研制的SBV荧光定量RT-PCR具有相近的敏感性,两者对140份SBV核酸阳性样品的检测符合率达96.4％ (135/140);可灵敏地检测出1 TCID50的SBV RNA,并具有良好的重复性;除道格拉斯病毒(Douglasvirus)外,与辛波血清群相关病毒核酸无交叉反应.用该方法对采自内蒙古呼和浩特市某养殖场的绵羊血清(n=47)和澳大利亚进口绵羊血清(n=47)的RNA进行了检测,结果未发现SBV核酸阳性样品.SBV荧光定量RT-PCR检测方法的建立为应对施马伦贝格病提供了有效的检测手段.
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关键词
施马伦贝格病毒核酸引物TaqMan探针荧光定量RT-PCRSchmallenberg virus (SBV)nucleic acidprimerTaqMan probereal-time quantitative reverse transcription-PCR (RT-qPCR)
分类号
S852.659.5
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2014.11.012
发布时间
2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家质检总局科技计划项目（(2013IK054)）
“十二五”国家科技支撑计划课题（(2013BAD12B01)）
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