换一批牛偏爱密码子优化后的Beta蛋白多克隆抗体制备
Preparation of Polyclonal Antibody against Beta Protein Optimized with Bovine Preferred Codons
摘要本研究旨在优化λ噬菌体bet基因,使其能够在牛细胞中高效表达,通过密码子优化及全基因合成方法制备牛bet基因,并进行原核表达和多克隆抗体制备及抗体效价评估.从GenBank中获得λ噬菌体bet基因的序列,登录号为AP005153,用牛偏爱密码子对其进行优化并将其合成.根据优化后的基因序列设计引物,用PCR扩增优化后的bet基因,随后将其克隆到pET28原核表达载体,并转化入大肠杆菌BL21中进行诱导表达.表达的蛋白产物利用亲和层析的方法进行纯化,用His tag的抗体进行Western blot鉴定.用纯化后的蛋白免疫CD1小鼠,得到抗Beta蛋白的血清,通过ELISA测定该多克隆抗体的滴度.结果表明:通过双酶切和测序,成功挑选出正确的原核表达质粒pET-bet;SDS-PAGE,电泳结果显示融合蛋白表达成功;用纯化后的蛋白免疫试验鼠后得到多克隆抗体,经Western blot检测,该多克隆抗体能与His-Beta融合蛋白特异性结合;经ELISA方法检测该多克隆抗体的滴度为1:41 700.成功地制备了Beta蛋白的多克隆抗体,为深入探索bet基因的生物学功能和在牛及大型哺乳动物中的应用奠定了基础.
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关键词
密码子优化Beta蛋白原核表达蛋白纯化多克隆抗体codon optimizationBeta proteinprokaryotic expressionprotein purifypolyclonal antibody
分类号
S823.2
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2015.10.008
发布时间
2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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