换一批enJSRV囊膜蛋白及其受体的瞬时表达与绵羊绒毛膜滋养层细胞融合的诱导研究
Study on the Transient Expression of enJSRV Envelope Protein and Its Receptor and the Induction of Trophoblast Cell Fusion in Sheep
摘要旨在深入研究内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)囊膜蛋白在绵羊胎盘形成过程中的作用,本研究体外培养了蒙古绵羊绒毛膜滋养层细胞,采用RT-PCR技术扩增出enJ SR V-env基因及其受体Hyal2基因全长序列,定向克隆于真核表达载体pEGFP-C1上.优化绒毛膜滋养层细胞电转染条件和测定电转效率.将构建好的真核表达质粒分别电转染到绒毛膜滋养层细胞中,在荧光显微镜下观察enJSRV囊膜蛋白及其受体Hyal2的瞬时表达情况.并研究高表达enJ SR V-env基因及通过RNA干扰沉默enJ SR V-env基因对绒毛膜滋养层细胞的细胞融合活性的影响.结果显示,真核表达质粒构建成功,分别命名为pEGFP-C1/enJSRV-env及pEGFP-C1/Hyal2.研究表明,绵羊绒毛膜滋养层细胞最佳电转染条件为脉冲电压150 V,脉冲时间5.0 ms,电击2次,间隔50 ms.转染pEGFP-C1/ enJSR V-env质粒及pEG FP-C1/ enJ SR V-env与pEGFP-C1/Hyal2共转染的绵羊绒毛膜滋养层细胞中多核细胞数目明显增加,平均每个视野分别可以观察到1.8和2.3个多核细胞.说明enJSR V-env对绒毛膜滋养层细胞的细胞融合有一定的促进作用.本研究为进一步探究enJSRV囊膜蛋白的结构和功能及绒毛膜滋养层细胞融合机理提供试验基础.
更多相关知识
关键词
内源性绵羊肺腺瘤病毒内源性逆转录病毒囊膜蛋白绒毛膜滋养层细胞细胞融合enJSRVendogenous retrovirusesenvelope proteintrophoblast cellscell fusion
分类号
S826.2
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2015.11.003
发布时间
2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
- 浏览7
- 被引7
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
