换一批SG97A平衡致死系统的构建及其初步应用
Construction and Preliminary Application of Balanced Lethal System Based on Attenuated Salmonella SG97A
摘要敲除鸡伤寒沙门菌(SG)减毒疫苗株97A asd基因,构建宿主载体平衡致死系统并表达新城疫病毒(NDV)F蛋白,构建二价活菌苗.PCR扩增两段位于asd基因外侧的序列作为等位基因,以氯霉素抗性(CmR)基因替代asd基因,构建自杀质粒pGMB151△asd::CmR,通过E.coli x7213与SG97A固相杂交,将质粒转入SG97A,反向筛选获得SG97A△asd::CmR,利用质粒pCP20去除CmR后,DAP的依赖菌株命名为SG97 A△asd.将含asd基因的质粒pYA3334转入SG97A△asd中构建宿主载体平衡致死系统,并表达NDV-F蛋白.结果表明,通过等位基因重组方法,成功构建SG97A△asd及宿主载体平衡致死系统,重组菌能够表达NDV-F蛋白,并能在鸡体内诱导产生特异性抗体.本研究成功构建SG97A△asd宿主载体平衡致死系统,并表达NDV-F蛋白及其诱导宿主产生抗体,为应用该系统构建二价活菌苗的研究奠定了基础.
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关键词
鸡伤寒沙门菌asd基因宿主载体平衡致死系统NDV-F蛋白Salmonella gallinarum(SG)asd genevector-host balanced lethal systemNDV-F protein
分类号
S852.612
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2015.12.016
发布时间
2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
公益性行业(农业)项目（201403054）；
“863”项目（2011AA10A212）；
中国博士后基金（2014M551670）；
江苏省重点实验室开放课题（0273896034819）；
江苏省博士后基金（1302067C）；
扬州大学创新培育基金（2013CXJ070）
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