换一批1型鸭甲肝病毒VP3蛋白的抗血清中和活性分析及B细胞表位鉴定
Neutralizing Activity Analysis of VP3 Antiserums and B-cell Epitopes Identification of VP3 Protein form Duck Hepatitis A Virus Type 1
摘要旨在探究1型鸭甲肝病毒(DHAV-1)VP3蛋白抗血清的中和活性并鉴定VP3的线性B细胞表位.利用pGEX-4T-1表达载体,在BL21(DE3)宿主菌中原核表达DHAV-1 VP3基因,以切胶纯化出的蛋白质为抗原免疫兔制备多克隆抗体,通过鸡胚中和试验对多抗的中和效价进行检测;采用Karplus&Schulz、Emini、Jameson-Wolf和Parker方法分别对柔韧性、表面可及性、抗原性及亲水性进行分析,得到了4条候选线性B细胞表位,以制备的兔抗VP3多克隆抗体为一抗,通过间接ELISA方法对人工合成的B细胞表位进行鉴定,并进一步用临床鸭血清样品对鉴定的B细胞表位的抗体检测能力进行评估.结果显示,VP3在BL21 (DE3)中以包涵体形式表达,大小约54ku,Western blot分析表明重组蛋白质具有较好的反应原性.制备的兔抗VP3多克隆抗体的琼扩效价达到1:16,并能中和DHAV-1,中和效价为1: 39;利用间接ELISA鉴定出GKRKPCRRPIHKPKNPPQEP(1-20 aa)、FNT-GRYQMSWYPIADGEQSL(131-150 aa)和VNSSAPSNID(200-209 aa)为VP3的B细胞表位,抗体检测能力试验结果显示表位肽可检测临床DHAV-1鸭血清.本研究表明DHAV-1 VP3的抗血清具备一定的中和活性,1-20aa、131-150 aa和200-209 aa为VP3的B细胞表位且具有临床应用前景.
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关键词
1型鸭甲肝病毒VP3蛋白多克隆抗体中和活性B细胞表位duck hepatitis A virus type 1VP3 proteinpolyclonal antibodiesneutralizing activityB-cell epitopes
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DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2016.01.019
发布时间
2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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