换一批施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的表达及单克隆抗体制备
Expression of the Nucleocapsid Protein of Schmallenberg Virus Using the Bac-to-Bac(R) Baculovirus Expression System and Preparation of Monoclonal Antibodies against This Protein
摘要为表达与纯化具有天然构象的施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)核衣壳(N)蛋白,并制备其单抗(McAb),本研究在SBV-N基因的N端加入6个组氨酸(6×His)标签后,将其克隆至杆状病毒表达载体pFast-BacTM1中,构建重组供体质粒pFastBac-His-SBV-N.将pFastBac-His-SBV-N转化DH10Bac E.coli,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒rBacmid-His-SBV-N.将rBacmid-His-SBV-N转染Sf9昆虫细胞制备表达His-SBV-N融合蛋白的重组杆状病毒,借助Ni-NTA琼脂糖纯化重组杆状病毒感染Sf9细胞中的His-SBV-N蛋白.以纯化的His-SBV-N免疫BALB/c小鼠制备McAb,利用ELISA叠加试验检测McAb抗原识别位点的异同,并采用高碘酸钠法对识别不同抗原表位的McAb进行辣根过氧化物酶(HRP)标记.最终获得了4株识别不同抗原表位的McAb(2A11、2E1、4H11和6E12)并进行了HRP标记;亚型鉴定表明,2A11为IgG1亚型,2E1、4H11和6E12均为IgG2b亚型;间接免疫荧光试验证实,4株McAb均能够识别稳定表达SBV-N蛋白的BHK-21细胞系;Western blot进一步表明,HRP标记的4株McAb均与His-SBV-N蛋白发生特异性反应.His-SBV-N融合蛋白及其McAb的成功制备,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料.
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关键词
施马伦贝格病毒核衣壳蛋白杆状病毒表达载体昆虫细胞单克隆抗体Schmallenberg virus (SBV)nucleocapsid (N) proteinbaculovirus expression vectorinsect cellsmonoclonal antibody (McAb)
分类号
S852.659.5
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2016.06.026
发布时间
2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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