换一批猪链球菌3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的原核表达、活性检测和同源建模
Prokaryotic Expression, Activity Assay and Homology Modeling of the 3-hydroxy-3-methylglutaryl Coenzyme A Reductase from Streptococcus suis
摘要旨在以猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)为药靶,给S.suis病防治研制新型抗菌药提供理论和试验基础.原核表达了S.suis HMGR,用Ni-NTA树脂对重组蛋白质进行了纯化,并用分光光度法测定了其酶活力.此外,运用CLUSTALW对同源HMGR氨基酸序列进行多序列比对.通过SWISS-MODEL对S.suis HMGR三维结构进行同源建模,并用PROCHECK评价模型的质量.酶活力测定结果显示,催化HMG-CoA还原为甲羟戊酸的反应中,S.suis HMGR最佳反应温度和pH分别为37℃和5.0,其Vmax和Km为846 U· mg-1和0.213 mmol·L-1.经分析显示,肺炎链球菌HMGR晶体结构(PDB ID:3QAE_A)是构建S.suis HMGR三维结构的最佳模板.构建的三维结构模型经质量评估证实为可靠的理论模型,将有助于虚拟筛选出对抗S.suis感染的新型抗生素,酶活力的测定为用试验手段验证S.suis HMGR抑制剂的有效性提供了可行性的方法.
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关键词
链球菌HMGR原核表达蛋白质纯化酶活测定同源建模Streptococcus suis3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductaseprokaryotic expressionprotein expressionenzyme activity assayhomology modeling
分类号
S852.61
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2016.11.021
发布时间
2016-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省普通高等学校青年创新人才项目（2015KQNCX173）
广东省自然科学基金（2014A030310020）
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