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猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重荧光定量PCR检测方法的建立

Duplex Real-time PCR Method for Detection of Mycoplasma hyopneumoniae and Mycoplasma hyorhinis

二维码有效期 120s

摘要建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法.根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物,分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针,建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系,同时检测其敏感性、特异性和重复性.建立的双重荧光定量PCR对猪肺炎支原体和猪鼻支原体的最低检测值均为10 copies·μL-1;与猪源致病菌、病毒和其他常见细菌均无交叉反应;各浓度标准品的Ct值变异系数小于5％,重复性好.检测72份临床样本,其中猪肺炎支原体的肺阳性率为80％,鼻拭子阳性率22％,支气管肺泡灌洗液阳性率58.33％;猪鼻支原体的肺阳性率为40％,鼻拭子阳性率66％,支气管肺泡灌洗液阳性率41.67％.建立的双重荧光定量PCR方法比普通PCR更加敏感,实用性强,可用于临床样品的检测.该方法能同时快速和定量地检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体,在短时间内获得样品的多个信息,快速地解决了多次检测所需的时间以及经济消耗,为猪肺炎支原体和猪鼻支原体的监测和防控提供了新型、可靠的检测技术.

作者 武昱孜 ^[1] 熊祺琰 ^[2] 刘蓓蓓 ^[2] 张珍珍 ^[2] 王佳 ^[2] 华利忠 ^[2] 韦艳娜 ^[2] 邵国青 ^[2] 学术成果认领

作者单位江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;省部共建国家重点实验室培育基地-江苏省食品质量安全重点实验室,南京210014 ^[1] 江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014 ^[2]

关键词猪肺炎支原体猪鼻支原体双重荧光定量PCR Mycoplasma hyopneumoniae Mycoplasma hyorhinis duplex real-time PCR

分类号 S858.28

栏目名称

预防兽医

DOI 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.08.013

发布时间 2017-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

江苏省农业科技自主创新项目（CX(14)2040） :肉类生产与加工质量安全控制协同创新中心