换一批猪鼻支原体血清抗体间接ELISA检测方法的建立
Establishment of an Indirect ELISA Detection Method for Mycoplasma hyorhinis
摘要猪鼻支原体是猪体内的一种常在菌,可引发猪的多发性浆膜炎、肺炎、关节炎、心包炎等炎症.由于猪鼻支原体与猪其他支原体有较高的交叉反应,目前并没有特异性的血清学诊断方法的报道.本试验以建立猪鼻支原体特异性ELISA检测方法为目的,将猪鼻支原体的表面可变脂蛋白Vlp的特定肽段作为包被抗原,优化该方法检测条件,最终确定:其抗原的最佳包被浓度为0.312 5 μg· mL-1;一抗的最佳稀释度为1∶100,作用时间为30 min;二抗的最佳稀释浓度为1∶20 000,最佳作用时间为30 min;显色时间为10 min;阴阳性的判定值为0.27.交叉性试验结果显示,Vlp抗原与猪其他支原体阳性血清及猪常见传染病阳性血清均无交叉反应.在重现性试验中,批内及批间的变异系数均低于10％,证明重现性良好.利用所建立的方法对已知阴性及阳性样本进行检测,结果显示特异性和灵敏度均良好.最后,用建立的方法对人工感染后28 d的猪血清和247份临床样品进行检测,感染猪血清抗体呈阳性,建立的Vlp-ELISA方法、吐温20膜蛋白-ELISA方法对不同猪群临床样品检测的阳性率趋势相同.综上所述,建立的Vlp-ELISA方法特异性、稳定性良好,可以广泛用于临床猪鼻支原体血清抗体检测,为该病的检测和防控提供了重要工具.
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