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猪伪狂犬病病毒感染对PK-15细胞增殖和热休克蛋白27、70和90表达的影响

Effect of Porcine Pseudorabies Virus Infection on Proliferation of PK-15 Cell and Expression of Heat Shock Protein 27,70 and 90

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摘要研究猪伪狂犬病病毒(PRV)-YY株感染对宿主细胞增殖和热休克蛋白(HSP) 27、70和90表达的影响.用Reed-Muench法测定PRV-YY滴度后,用不同病毒量感染PK-15细胞,采用iCELLigence实时无标记细胞功能分析仪监测细胞的增殖,并用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫印迹试验(Western blot)分别检测感染后细胞中病毒核酸含量及三种HSPs mRNA和蛋白质表达的变化.结果表明,当用80 TCIDs0和100 TCID50的病毒量(滴度为106TCID50·0.1 mL-1)感染细胞时,在所监测的时间内细胞指数均显著低于对照组;当感染60 h时,除10 TCID50感染组外,其余各组的细胞指数均极显著低于对照组(P＜0.01);用10 TCID50病毒感染细胞60 h时,细胞中病毒核酸含量达峰值;当病毒黏附结束即感染0h时,HSP70和90 mRNA的转录升高(P＜0.01),两者分别在感染6、12h后表达降低(P＜0.01),而HSP27在感染0h升高(P＜0.05),3h时极显著高于对照组(P＜0.01),但在感染48 h后其表达降低;PRV感染细胞后三种HSP蛋白的变化趋势基本与其mRNA水平的变化类似(部分时间点不同).结果表明,一定滴度的PRV可显著抑制PK-15细胞的增殖,PRV感染可诱导PK-15细胞迅速发生应激反应,使HSP27、70和90表达快速升高,三种HSP的快速应答可能在保护细胞免受PRV-YY的感染损伤起着重要作用.