换一批山羊FST慢病毒载体构建及其对卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响
Construction of Goat FST Lentivirus Vectors and Its Effect on the Proliferation of Ovarian Follicular Granulosa Cells
摘要研究卵泡抑素(FST)对山羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响.采集山羊卵巢组织、分离培养原代卵巢卵泡颗粒细胞,RT-PCR克隆山羊FST,设计shRNA片段,构建慢病毒过表达载体和干扰载体,感染原代卵巢卵泡颗粒细胞,qPCR技术检测过表达与干扰的效果,CCK-8检测细胞的增殖效果.结果 显示:分离培养的山羊卵巢卵泡颗粒细胞经促卵泡素受体(FSHR)免疫荧光鉴定,阳性率为95％;慢病毒感染颗粒细胞时荧光蛋白的表达占比80％;qPCR验证FST过表达和干扰慢病毒载体的效果均显著(P＜0.05);过表达FST显著(P＜0.05)抑制卵巢卵泡颗粒细胞的增殖,干扰FST显著(P＜0.05)促进卵巢卵泡颗粒细胞增殖.笔者分离出山羊卵巢卵泡颗粒细胞,成功构建FST过表达和干扰两种慢病毒载体,感染结果表明FST能够抑制山羊卵巢卵泡颗粒细胞的增殖,为进一步研究FST在哺乳动物卵泡发育调控中的作用及其机制提供了基础资料.
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