换一批
换一批非洲猪瘟病毒P30蛋白的表达及抗体液相芯片检测方法的建立
Expression of ASFV P30 Protein and Development of ASFV Antibody Detection Method Based on x-MAP Technology
摘要本研究旨在为建立高效、快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的抗体液相芯片检测方法.首先构建pET-28a-p30表达载体,利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统表达ASFV重组P30蛋白,然后将重组P30蛋白与羧基化的荧光微球偶联,建立ASFV P30抗体液相芯片检测方法.经鉴定,重组质粒成功转入大肠杆菌BL21感受态细胞,并以包涵体形式表达,Western blot结果显示重组P30蛋白可以与AS-FV阳性血清产生特异性反应,证明其具有良好的反应原性.建立的ASFV抗体液相芯片检测方法检测中值荧光强度(median fluorescent intensity,MFI)阈值为1 575.7,最佳结合蛋白浓度为每1.25×106 个微球6 μg,最佳血清稀释度为1∶600,最佳二抗浓度为1 μg·mL-1,该方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性.用建立的方法和商品化ELISA试剂盒同时对92份临床采集的猪血清样本进行检测,结果显示二者符合率为92.39%.本研究成功表达重组P30蛋白,并建立了ASFV P30抗体液相芯片检测方法,为ASFV感染早期的血清学检测提供了新的方法,也为多种病原体的抗体检测奠定了基础.
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关键词
非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达液相芯片技术抗体检测African swine fever virusP30 proteinprokaryotic expressionliquid chip technolo-gyantibody detection
分类号
S852.659.1
栏目名称
预防兽医
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2023.10.026
发布时间
2023-11-07
基金项目
山东省重点研发计划
山东省农业重大应用技术创新项目
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