摘要旨在探讨L-半胱氨酸(L-Cys)对体外培养绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)增殖、凋亡和类固醇分泌的影响.本研究采集1～1.5岁龄体重相近饲养条件相同的30只健康性成熟小尾寒羊母羊新鲜卵巢,从优势卵泡(2～8 mm)中收集GCs,随机分为5组,每组6个重复,各组添加L-Cys浓度分别为0、100、300、500和700 μmol·L-1,培养48 h后用CCK-8试剂盒进行细胞增殖活力测定,Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测GCs的凋亡情况,采用ELISA检测GCs培养液上清中孕酮和雌二醇的分泌水平并采用实时荧光定量PCR和Western blot分析L-Cys对绵羊颗粒细胞增殖相关基因(PCNA、CCND2、CCNB1)、凋亡相关基因(BAX、Caspase-3、Bcl-2)和类固醇分泌相关基因的(STAR、3β-HSD、CYP11A1、CYP19A1)mRNA和蛋白表达的影响.结果显示,100、300和500 μmol·L-1组的L-Cys均可显著促进绵羊GCs的增殖活力(P＜0.05),并显著抑制其凋亡率(P＜0.05).添加300 μmol·L-1的L-Cys显著抑制了孕酮(P4,P＜0.05)的分泌.进一步研究发现,300 μmol·L-1和500 μmol·L-1组的L-Cys可以上调增殖相关基因(PCNA、CCND2、CCNB1)mRNA表达水平,其中300 μmol·L-1组的增殖蛋白(PCNA、CC-ND2、CCNB1)表达量显著上升(P＜0.05);100 μmol·L-1和300 μmol·L-1组显著下调凋亡相关基因(BAX、Caspase-3)mRNA(P＜0.05)及其蛋白表达水平(P＜0.05).添加300 μmol'L-1 L-Cys显著降低了类固醇相关基因(STAR、3β-HSD)mRNA 及蛋白表达水平(P＜0.05),添加 100 μmol·L-1 和 300 μmol·L-1 L-Cys 显著升高了类固醇相关基因(CYP11A1、CYP19A1)mRNA(P＜0.05)及其蛋白表达水平(P＜0.05).综上,L-Cys通过上调基因PCNA、CCNB1、CCND2、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达、下调基因BAX、Caspase-3 mRNA及其蛋白表达,促进绵羊GCs增殖,抑制其凋亡;L-Cys通过下调基因STAR、3β-HSD mRNA及其蛋白表达以及上调基因CYP11A1 mRNA及其蛋白表达抑制P4的分泌.