猪瘟病毒C株表位突变毒株的构建及拯救
The Construction and Rescue of Epitope Mutant Strain of Classical Swine Fever Virus C Strain
摘要本研究旨在突变猪瘟病毒C株WH303位点,构建感染性克隆,为猪瘟病毒C株标记疫苗的研究提供候选毒株.本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经重叠PCR方法突变WH303位点,再分别连接至C株和C-flag株全长感染性克隆.体外转录RNA,转染PK15细胞,细胞连续传代完成病毒的拯救和增殖.结果显示,经特异性限制内切酶酶切反应验证,感染性克隆构建成功.经RT-PCR、过氧化物酶单层细胞试验检测,表明病毒成功拯救.病毒细胞传代至17代,检测到病毒,表明病毒可以稳定传代.综上,本研究成功构建了 C株WH303突变感染性克隆MC和MC-flag,并成功拯救MC株,得到可以稳定传代的病毒株.
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