摘要旨在筛选对黑色素生成起调节作用的小RNA,并探究其对山羊肤色及毛色的调控机制.本研究采集了健康酉州乌羊(Youzhou dark goat,YZDG)、川东白山羊(Chuandong white goat,CDWG)100日龄胎羊皮肤样本(n=3),和健康 2～3 周岁大足黑山羊(Dazu black goat,DBG)、内蒙古绒山羊(Inner Mongolia cashmere goat,IMCG)个体皮肤样本(n=3),利用组织切片染色技术观察皮肤中黑色素沉积情况;通过小RNA测序技术筛选差异miRNAs;培养B16-F10皮肤黑色素瘤细胞,利用细胞转染、qPCR、Western Blot、黑色素含量检测等技术验证miR-129-5p对黑色素生成的影响.结果显示,黑色素颗粒明显在YZDG胎羊皮肤和DBG毛囊的毛球、毛干、外根鞘等部位沉积,而在CDWG胎羊皮肤和IMCG表皮、毛囊中没有被观察到.经测序分析,在肤色差异的YZDG和CDWG中筛选到62个差异表达miRNAs,其中 31个在乌皮山羊中上调,31个下调.在毛色差异的DBG和IMCG中,筛选到38个差异表达miRNAs,其中10个在黑色被毛山羊中表达上调,28个表达下调.两组测序结果均显示miR-129-5p在乌皮和黑色被毛山羊皮肤中高表达(P＜0.05).在细胞中过表达miR-129-5p后,相比于对照组.mimics组细胞黑色素沉积量提高了 18.9％(P＜0.05),TYR、TYRP1基因表达量分别上调57.3％和16.5％(P＜0.05),蛋白表达量分别显著上调49.2％和40.2％(P＜0.05);但MITF基因及其蛋白表达量无显著变化(P＞0.05).在抑制miR-129-5p后,inhibitor组TYR基因mRNA表达下调38.9％、蛋白表达水平下调21.1％(P＜0.05);TYRP1、MITF蛋白表达水平分别下调25.3％及28.4％(P＜0.05).本研究发现,miR-129-5p在不同肤色及毛色的山羊皮肤中差异表达,且可通过调控TYR、TYRP1等关键基因的表达影响黑色素的生成,是山羊肤色和毛色形成过程的重要调节因子.