换一批牛冠状病毒S1蛋白的真核表达及间接ELISA方法的建立与应用
Eukaryotic Expression of Bovine Coronavirus S1 Protein and Establishment and Application of Indirect ELISA
摘要为建立一种检测牛冠状病毒(BCoV)的抗体间接ELISA检测方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白,并作为包被抗原,建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法,应用于临床样品检测.结果显示,S1蛋白大小约100 ku,可表达于昆虫High5细胞培养基上清,经Western blot鉴定S1蛋白抗原性良好;经反应条件优化,确定抗原包被浓度为0.125 μg·mL-1,血清稀释度为1∶200;采用1％明胶,于37 ℃封闭3 h;血清样品于37 ℃孵育30 min;酶标二抗的稀释度1∶25 000,37 ℃孵育45 min;37 ℃避光显色13 min;临界值为0.297;经检验,该方法特异性良好;批间及批内变异系数均小于10％.当临界值为OD450 nm为0.297时,若以IFA为标准,ELISA的敏感性为96.88％(31/32),特异性为87.50％(7/8),与IFA具有很强的一致性(κ=0.844,P＜0.01);若以中和试验为标准,ELISA的敏感性为100.00％(31/31),特异性为88.89％(8/9),与血清中和试验具有很强的一致性(κ=0.925,P＜0.01).采用该方法对303份牛血清进行检测,BCoV阳性率为74.91％.由此说明,本研究建立的ELISA方法特异性强,敏感性高,重复性好,可用于BCoV的血清学调查和临床诊断,并可以应用于替代中和试验检测BCoV免疫后抗体水平.
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关键词
牛冠状病毒昆虫杆状病毒表达系统S1蛋白间接ELISAbovine coronavirusinsect baculovirus expression systemS1 proteinindirect ELISA
分类号
S852.659.6
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2024.05.023
发布时间
2024-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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