摘要山羊地方性鼻内肿瘤(enzootic nasal tumor,ENT)是山羊的病毒性传染病,由山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats,ENTV-2)所引起,感染后可以导致山羊的鼻道筛骨上皮细胞发生不可逆的癌变,已在世界范围内广泛存在,对山羊养殖业造成严重的经济损失.为建立快速、准确且能定量分析ENTV-2的检测方法,本研究根据GenBank上发布的ENTV-2 env基因(MT254061.1)保守区域设计引物和TaqMan探针,建立ENTV-2 TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性、重复性与临床检测效果进行验证.结果显示,重组质粒标准品模板浓度为6.30 × 102～6.30 × 107 copies·μL-1呈现良好的线性关系,相关系数R2为0.996 5,扩增效率为110％,线性方程的斜率为-2.953,最低检测限度为6.30×101 copies·μL-1;组内变异系数和组间变异系数均小于2％,重复性好;与口蹄疫病毒((foot-and-mouth disease virus,FMDV)、小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)、蓝舌病毒(bluetongue virus)、羊内源性逆转录病毒(endogenous retroviruses)等均无交叉反应,表明该方法具有很好的特异性.利用本研究所建立的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法对29份临床样品进行检测,该方法较普通PCR方法的检出率更高.综上表明,本研究成功建立了ENTV-2 TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法,为ENTV-2的快速诊断和流行病学调查提供技术手段.