缺氧对鸡成肌细胞肌纤维类型转化作用的机制探究
The Mechanism of Effect of Hypoxia on Myofiber Type Transformation in Chicken Myoblasts
摘要旨在利用氯化钴(CoCl2)模拟肌细胞缺氧,并结合转录组测序分析缺氧对肌纤维类型及相关基因的影响.本试验以鸡原代成肌细胞为研究对象,使用不同浓度氯化钴(0、50、100、200和400 μmol·L-1)处理细胞,每组设3个重复孔.通过检测缺氧标志基因表达和观察细胞形态筛选氯化钴浓度,确定最适宜浓度用于建模.随后,将收集的细胞通过Illumina测序检测缺氧组和对照组鸡成肌细胞的转录表达谱,并分析差异基因和富集到的信号通路.结果表明,200 μmol·L-1氯化钴最适合构建鸡胚成肌细胞缺氧模型,通过转录组测序发现,在24和48 h时,缺氧组和对照组分别筛选出1 474个和2 028个差异表达基因,其中有959个差异基因在两个时间点共有.GO和KEGG分析发现,在缺氧环境下,鸡成肌细胞的信号受体活性调节、质膜组成成分、神经活性配体受体作用、PI3K-AKT、肌肉收缩等信号通路关键因子发生明显表达变化.测序和qRT-PCR结果一致显示,缺氧处理后慢肌纤维特异性基因如MYH7B、CSRP2显著上调,而快肌纤维特异性基因如MYH1F、MYH1D、TNNI2、SOX6显著下调,表明缺氧能够诱导鸡成肌细胞快肌纤维向慢肌纤维转换.本研究初步揭示了缺氧对鸡成肌细胞肌纤维类型转换的机制,并提供相关基因表达数据库,为未来家禽肉质和哺乳动物缺氧研究提供了重要参考.
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