摘要旨在构建食源性产单核细胞李氏杆菌毒力岛4(LIPI-4)中的抗转录终止子(Lm4b_02325)和未知蛋白(Lm4b_02326)基因的双缺失株,研究Lm4b_02325/26基因对产单核细胞李氏杆菌(Listeria monocytogenes,LM)的部分生物学特性的影响.利用同源重组技术构建LM928△Lm4b_02325/26双缺失株,测定LM928和LM928△Lm4b_02325/26双缺失株在脑心浸出液肉汤(brain heart infusion broth,BHI)、不同EtOH浓度、不同NaCl浓度、不同pH、不同温度下的D600nm,绘制生长曲线;RT-qPCR检测双基因缺失前后体外BHI培养环境下部分毒力因子转录水平;平板计数测定其对鼠巨噬细胞RAW264.7的黏附、侵袭与胞内增殖情况;感染C57BL/6小鼠后检测肝、脾、脑组织中的细菌数量.结果表明,成功构建具有遗传稳定性的双缺失株LM928△Lm4b_02325/26.在含0.5％～10％NaCl或3％～4.5％EtOH的培养基中,双缺失株与野毒株生长没有明显差异,在pH=5条件下,双缺失株的生长率显著高于野毒株,pH=9条件下双缺失株的生长率显著低于野毒株.在不同温度(4 ℃、37 ℃、42 ℃)BHI培养基中,双缺失株与野毒株生长没有明显差异.Lm4b_02325/26基因双缺失株在BHI培养基中毒力因子 hly、inlC和PlcA 极显著上调(P＜0.01),mpl、inlB、actA、inlP、PlcB、prfA、SigB、iap 和inlA极显著下调(P＜0.01);双缺失株对RAW264.7细胞的黏附率(14.86％)和侵袭率(2.23％)明显低于野毒株的黏附率(22.93％)和侵袭率(4.28％)(P＜0.01);3、6、12 h时胞内增殖数量极显著低于野毒株(P＜0.01);双缺失株与野毒株感染小鼠后,载菌量在肝、脾中没有显著差异,在脑组织中双缺失株载菌量为104,高于野毒株的103.07,差异极显著(P＜0.01).综上认为,LIPI-4的Lm4b_02325和Lm4b_02326基因参与LM毒力因子的表达和脑组织的定植能力,与弱酸强碱条件下适应力及对RAW264.7细胞的黏附、侵袭和胞内增殖有关.本研究为LIPI-4的功能研究奠定了基础.