换一批INTS11通过介导CDK2和CYCLIND1的转录促进牛成肌细胞增殖
INTS11 Promotes the Proliferation of Bovine Myoblasts by Mediating the Transcription of CDK2 and CYCLIND1
摘要旨在验证牛INTS 11基因在成肌细胞中的功能作用,通过生物信息学分析探讨INTS11的CDS区序列及其编码蛋白的特征,并使用不同分子试验技术验证其在牛成肌细胞增殖过程中发挥的作用.本研究对牛INTS11基因序列与其他物种进行同源性对比并构建生物进化树,对其编码蛋白进行理化性质和功能结构分析以及亚细胞定位.并以体外分离培养的3月龄健康胎牛成肌细胞为试验材料,克隆成肌细胞中INTS11的全部CDS区序列,构建INTS11的过表达载体并设计基因的干扰序列,通过CCK8、Edu、RT-qPCR等技术探究其对成肌细胞增殖的影响.生物信息分析结果表明,CDS区序列全长为1 800 bp,具有MBL-foldmetallo-hydro和 β-CASP基序两个功能结构域,属于非跨膜蛋白,且细胞定位主要分布于细胞质.在成肌细胞中转染pcDNA3.1-INTS11质粒,结果显示在72～96 h时试验组的成肌细胞比对照组的增殖速度显著增加(P＜0.05);Edu试验发现阳性细胞数目显著增加(P＜0.05);RT-qPCR结果表明增殖标志因子CDK2、CYCLIND1的mRNA表达水平与对照组相比显著上升(P＜0.05).转入干扰序列后,细胞增殖速度显著下降(P＜0.05),同时增殖标志因子CDK2、cyclin D1的mRNA表达水平与对照组相比显著下降(P＜0.05).本研究预测了 INTS11在家养动物中的保守性,并且INTS11蛋白具有两个功能结构域,发现其通过介导CDK2、CYCLIND1的mRNA转录促进牛成肌细胞增殖,其结果完善了调控骨骼肌的基因网络,为后序探讨调控骨骼肌生长机制提供理论支持.
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分类号
S823.2
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2024.07.013
发布时间
2024-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
中国农业科学院创新工程（ASTIP-IASO3）
国家肉牛牦牛产业技术体系项目（CARS-37）
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