摘要旨在建立鸽脂肪前体细胞的体外分离、培养、鉴定和成脂诱导分化的方法.本研究采集3只健康的1日龄银王鸽皮下脂肪组织,利用Ⅰ型胶原酶进行消化以分离脂肪前体细胞,在脂肪前体细胞常规分离法基础上进行分离方法改良,对获得的脂肪前体细胞进行原代和传代培养,并观察细胞形态,通过免疫荧光鉴定特异性标记DLK1,确认脂肪前体细胞.通过在培养基中添加胰岛素和油酸钠进行成脂诱导分化,使用BODIPY493/503染色观察细胞中的脂滴分布情况,通过甘油三酯测定试剂盒检测细胞中甘油三酯的含量,采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测脂肪前体细胞成脂分化过程中分化相关基因的表达.研究结果表明,鸽脂肪前体细胞呈梭形,改良分离法比常规分离法能够获得更多的脂肪前体细胞;与37 ℃相比,在41 ℃培养温度下,获得的脂肪前体细胞数目显著增加(P＜0.001).免疫荧光结果表明,DLK1表达为阳性,说明获得的是脂肪前体细胞.BODIPY493/503染色结果显示,分化6 d的细胞中产生大量的脂滴.且随着分化时间的增加,细胞中甘油三酯的相对含量也显著增加(P＜0.01).qPCR 结果显示,在添加诱导剂 2 d时,PPARγ、SCD、DGAT2、PLIN2、FASN、AFABP、LPL 基因的表达量显著上调(P＜0.05),之后随分化时间的增加表达逐渐上调;SREBF1基因在分化2 d时表达量显著上调(P＜0.05),之后表达量不变;ACACA基因在分化2 d时,表达量显著增加(P＜0.05),在分化4 d时表达量达到高峰.Western blot结果表明,在分化2 d时,PPARγ、LPL和PLIN2的表达量显著上调(P＜0.05),之后随着分化时间的延长,表达量进一步升高.综上所述,本研究改良了脂肪前体细胞常规分离法,成功分离获得鸽脂肪前体细胞,且筛选出最适培养温度.获得的鸽脂肪前体细胞经胰岛素和油酸钠诱导后能高效地分化为成熟的脂肪细胞.本研究为鸽脂肪代谢分子调控机制的研究提供了良好的细胞模型,同时也为鸽生物培育肉的制备提供种子细胞和技术指导.