换一批利用单B细胞分选技术制备猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体及其在ELISA中的应用
Development of Monoclonal Antibodies against Classical Swine Fever Virus E2 Protein by Single B Cell Sorting Technology and Its Application in ELISA
摘要本研究旨在建立一种猪瘟病毒E2单抗竞争ELISA检测方法,用于评价猪瘟C株弱毒苗和E2亚单位疫苗的免疫效果.首先,构建猪瘟E2杆状病毒表达载体pFastBAC,通过悬浮培养SF9细胞高效表达E2蛋白;其次,用纯化的E2蛋白免疫BABL/c小鼠,通过流式分选IgM-PE-/E2-APC+型单个B细胞.然后,利用半巢式PCR分别扩增E2特异性IgG抗体的重链和轻链,测序后将抗体重链及轻链构建到pCDNA3.1载体,再将构建好的质粒共转染至HEK-293细胞,制备猪瘟E2单克隆抗体.结果表明,本研究通过单B细胞分选技术获得的两株单克隆抗体,即 mAb3A9(IgG1,kappa)和 mAb4F7(IgG2a,lambda),分别识别猪瘟E2蛋白B细胞线性表位25GLTTTWKEYSHDLQL39 和259 GNTTVKVHASDERGP273.此外,用上述两株单克隆抗体及E2蛋白建立的单抗竞争ELISA检测方法,在血清样本检测过程中,均展现出优异的诊断敏感性(97.49％,95.97％)及特异性(96.08％,94.38％),该研究为我国猪瘟的逐步净化提供了有利的技术支撑.
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分类号
S858.285.3
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2024.10.029
发布时间
2024-11-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家生猪技术创新中心战略重点研究项目（NCTIP-XD/C03）
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