转录组测序筛选牛卵泡发育偏差和优势卵泡选择相关基因
Transcriptome Sequencing was Used to Screen Genes Related to Follicular Development Bias and Dominant Follicle Selection in Cattle
摘要旨在筛选牛卵泡发育偏差和优势卵泡(dominant follicle,DF)选择相关基因.本研究选取6头10月龄健康海福特青年母牛,同期发情后平均分为两组,第一组采集第一个卵泡发育波出现偏差前第一大卵泡(the largest follicle at predeviation,PDF1)和第二大卵泡(the second largest follicle at predeviation,PDF2),第二组采集第一个卵泡发育波出现偏差后第一大卵泡(the largest follicle at onset of deviation,ODF1)和第二大卵泡(the second largest follicle at onset of deviation,ODF2),提取卵泡颗粒细胞(granule cells,GCs)RNA 进行转录组测序,测序结果对照参考基因组,PDF1-VS-PDF2组筛选影响卵泡发育偏差的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),ODF1-VS-ODF2组、ODF1-VS-PDF1组和ODF1-VS-PDF2组筛选影响优势卵泡选择的DEGs并进行GO和KEGG富集分析、PPI分析筛选关键基因,通过RT-qPCR和Western blotting验证筛选基因的准确性.结果显示,PDF1-VS-PDF2组发现220个DEGs,179个上调,41个下调,GO和KEGG分析显示PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路与卵泡发育相关,PPI分析显示MYC、BRCA1、EZH2、ARID1A、SMARCA4为中枢基因;ODF1-VS-ODF2组发现184个DEGs,93个上调,91个下调,GO和KEGG分析显示PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路、mTOR信号通路、TNF信号通路和Jak-STAT信号通路与卵泡发育相关,PPI分析显示POLR2A、FOS、HIF1A、KIT、SOCS3 为中枢基因;ODF1-VS-PDF1 组和 ODF1-VS-PDF2 组共发现 837 个 DEGs,360 个上调,477个下调,GO和KEGG分析显示mTOR信号通路、TNF信号通路、TGF-β信号通路、PI3K-Akt信号通路和孕激素(progestin,P4)介导的卵母细胞成熟通路与卵泡发育相关,PPI分析显示HIF1 A、RPS9、COL 1A2、PIK3R1、COL4A1、ITSN1、GNB1、RPL3、ESPL1、CUL7 为中枢基因.RT-qPCR 结果表明 BRCA1、ARID1A、EZH2 在PDF1表达量高于PDF2,POLR2A在ODF1表达量高于ODF2.Western blotting结果表明BRCA1和EZH2在PDF1表达量高于PDF2.本研究筛选出MYC、BRCA1、EZH2、ARID1A、SMARCA4可能在牛卵泡发育偏差发挥作用,POLR2A、FOS、HIF1A、KIT、SOCS3、RPS9、COL1A2、PIK3R1、COL4A1、ITSN1、GNB1、RPL3、ESPL1和CUL7可能在牛DF选择过程发挥作用,试验证实筛选的基因翻译为蛋白质发挥作用.研究结果为探索牛卵泡发育偏差和优势卵泡选择基因调控理论奠定基础.
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