换一批
换一批羊口疮病毒ORF112基因缺失毒株的构建及增殖能力分析
Construction and Replication Ability of the ORF112 Gene Deleted Orf Virus Strain
摘要利用同源重组技术构建羊口疮病毒(orf virus,ORFV)ORF112基因缺失毒株,为后续研制出高效、安全的ORFV基因工程疫苗提供候选毒株.以ORF112基因为靶基因,通过重叠PCR的方法将左、右同源臂及绿色荧光蛋白(EGFP)基因表达框,进行融合后与pUC19T载体连接,构建出pUC19T-ORFV-ΔORF112-EGFP基因转移载体.将转移载体重组质粒转染到Vero细胞与WT-ORFV基因组进行同源重组.采取有限稀释法和挑取单细胞克隆法,筛选并纯化出纯合的ORFV-ΔORF112-EGFP毒株,并对该基因缺失毒株遗传稳定性和增殖特性等进行研究.结果显示:利用有限稀释和挑取单细胞克隆方法,进行阳性重组病毒纯化,通过PCR验证和测序,成功地获得ORFV-ΔORF112-EGFP重组毒株.该重组毒株在系列传代过程中EGFP稳定表达且无减弱现象.该重组ORFV-ΔORF112-EGFP毒株与野生毒株的复制生长特性基本一致.成功构建并筛选得到纯化的ORFV-ΔORF112-EGFP基因缺失毒株,该毒株具有良好的遗传稳定性和复制能力,为后续ORFV基因工程疫苗的研制提供了候选毒株.
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分类号
S852.659.1
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2024.11.035
发布时间
2024-12-16
基金项目
国家自然科学基金（32302850）；
甘肃省科技计划项目（22JR5RA035）；
甘肃省科技重大专项（22ZD6NA001）；
中国农业科学院兰州兽医研究所基本科研业务费（1610312021008）
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