换一批
换一批抗犬瘟热病毒犬源化嵌合单链抗体scFv-Fc的制备与活性分析
Preparation and Activity Analysis of Canine Derived Chimeric Single Chain Antibody scFv-Fc against Canine Distemper Virus
摘要为减少和改善鼠源单克隆抗体在犬临床治疗中的异源性和功效,用RT-PCR方法从分泌抗犬瘟热病毒(CDV)中和单克隆抗体的鼠源杂交瘤细胞中扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),通过Linker将VH和VL连接获得单链抗体(scFv)基因,选择犬源抗体IgG B恒定区(Fc)连接到scFv的C末端获得犬源化嵌合单链抗体(scFv-Fc)基因;分别构建鼠源scFv与犬源化scFv-Fc的原核表达载体,通过大肠杆菌表达、纯化,用ELISA、IP-MA、细胞融合抑制和中和试验检测表达抗体的特异性和中和活性.结果显示:CDV鼠源scFv、犬源化scFv-Fc的ELISA最低检出浓度分别为14.38和102.75μg·mL-1;与表达的CDV H蛋白和CDV均发生特异性反应;能够抑制CDV H和F蛋白介导的细胞膜融合,完全保护细胞不出现病变的最低浓度分别为0.72和0.64 μg·mL-1.本研究成功制备了鼠源scFv与犬源化scFv-Fc嵌合抗体,为犬瘟热的临床治疗提供了候选抗体药物.
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关键词
犬瘟热病毒中和活性单链抗体嵌合抗体canine distemper virusneutralizing activitysingle chain antibodychimeric antibody
分类号
S852.43
栏目名称
基础兽医
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2024.12.038
发布时间
2025-01-13
基金项目
国家重点研发计划
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