换一批猪急性腹泻综合征冠状病毒N蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用
Establishment and Preliminary Application of an Indirect ELISA for Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus N Protein
摘要为建立一种猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)血清抗体的快速检测方法,本研究首先经PCR扩增SADS-CoV N基因,纯化鉴定后克隆至表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-N.重组N蛋白诱导表达并通过SDS-PAGE和Western blot鉴定后,采用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,以兔抗猪HRP-IgG作为二抗,利用方阵滴定法优化各反应条件,建立了一种以SADS-CoV N蛋白为靶标的检测SADS-CoV血清抗体的间接ELISA方法,并对此方法的敏感性、特异性、重复性及临床应用价值进行鉴定.SDS-PAGE及Western blot结果显示,重组表达的N蛋白约为70 ku,且具有良好的反应原性.采用该方法检测SADS-CoV阳性血清抗体效价可达1∶3 200,并且与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒(PCV)阳性血清均无交叉反应,具有良好的敏感性和特异性.批内和批间重复性试验的变异系数均小于10％,具有较好的重复性.利用该方法和间接免疫荧光方法(IFA)分别对50份猪临床血清样品进行检测,结果显示二者的总符合率为98％.综上,本研究建立了一种基于SADS-CoV N蛋白的间接ELISA抗体检测方法,可用于临床SADS-CoV血清抗体检测以及流行病学的监测,对防控SADS-CoV的流行具有重要意义.
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关键词
猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)N蛋白原核表达间接ELISAswine acute diarrhea syndrome coronavirus(SADS-CoV)N proteinprokaryotic expressionindirect ELISA
分类号
S852.659.6
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2025.01.029
发布时间
2025-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（U23A20236）
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（1610302022015）
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