换一批羊源肺炎克雷伯菌分离鉴定及其外膜囊泡提取方法的建立
Isolation and Identification of Klebsiella pneumoniae of Sheep Origin and Establishment of a Method for the Extraction of Its Outer Membrane Vesicles
摘要旨在探究羊源肺炎克雷伯菌的致病性及其外膜囊泡的提取方法.本研究对伴有咳嗽、腹泻症状死亡的绵羊剖检并采集肺,肝,空肠等病变器官,采用形态观察、生化特性鉴定,分子生物学鉴定及测序方法对病原菌进行分离鉴定;通过药敏试验、拉丝试验、毒力基因检测、致病性试验及病理组织学观察分析其致病性和耐药性;使用改良沉淀法提取其外膜囊泡,通过透射电镜,纳米粒径测定及SDS-PAGE进行鉴定.结果显示病原菌经分离纯化后镜下呈现卵圆形革兰阴性杆菌,结合生化试验及16S rRNA鉴定结果表明该病原菌为肺炎克雷伯菌;药敏试验结果显示病原菌对阿米卡星,头孢他啶,亚胺培南,哌拉西林四种药物敏感;拉丝试验结果符合阳性特征及毒力基因扩增显示荚膜多糖基因wzy-K1及代谢基因peg-344为阳性,确定该病原菌为高毒力肺炎克雷伯菌;小鼠致病性试验结果表明病原菌对小鼠半数致死量(LD50)浓度为1.8×105 CFU,经病理组织学观察肝脏、脾脏淤血且有大量炎性细胞浸润;透射电镜,纳米粒径测定显示沉淀物形态结构、粒径大小均符合细菌外膜囊泡特征,SDS-PAGE显示存在特征性条带.本试验成功从病死绵羊体内分离出高毒力肺炎克雷伯菌并通过沉淀法提取其外膜囊泡,为预防和治疗羊源肺炎克雷伯菌病提供参考及肺炎克雷伯菌外膜囊泡的基础研究提供帮助.
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分类号
S852.612
栏目名称
DOI
10.11843/j.issn.0366-6964.2025.01.033
发布时间
2025-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（32060781）
优质肉羊高效安全生产养殖技术示范推广-吉林省畜牧管理局（482022106）
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