摘要本研究旨在通过检测蒙古牛皮肤Qa-1b/NKG2A的表达特征,分析其参与皮肤免疫的功能,及Qa-1b在抗黑素瘤发展中可能发挥的作用.通过实时定量PCR、Western blot、免疫组织化学方法以及免疫共沉淀法对Qa-1b/NKG2A在皮肤中的表达进行相对定量和定位以及互作关系分析;以Qa-1b多肽为抗原,使用噬菌体展示技术,从羊驼黑色素瘤细胞纳米抗体文库中进行淘筛,获得结合性较强的纳米抗体(Qa-1b-VHH)序列;构建pET28a-Qa-1b-VHH原核表达重组质粒,通过IPTG诱导表达和镍柱纯化,获得Qa-1b纳米抗体.经ELISA检测Qa-1b纳米抗体与抗原的特异性后,将Qa-1b纳米抗体应用于Western blot和免疫组织化学方法检测组织中Qa-1b的表达,以及添加到B16黑素瘤细胞培养基中,通过CCK8法、细胞划痕法和Western blot法检测其对B16细胞增殖及迁移的影响以及与增殖和迁移相关蛋白表达情况.结果显示:Qa-1b和NKG2A在蒙古牛皮肤组织的毛囊外根鞘和血管内皮中表达,在犊牛皮肤中的表达量显著高于成年牛(P＜0.01或P＜0.001).且Qa-1b和NKG2A在皮肤中存在互作关系.所获得的Qa-1b纳米抗体特异性较强,可用作Western blot和免疫组织化学中的一抗检测其他组织中Qa-1b的表达;Qa-1b纳米抗体添加到B16细胞培养基中,应用CCK 8法和细胞划痕法检测该Qa-1b纳米抗体对B16细胞增殖和迁移有明显的抑制效果,细胞增殖过程中Ras、MEK1、CyclinD1、CDK4蛋白的表达显著下调(P＜0.01或P＜0.001).本试验揭示了 Qa-1b/NKG2A参与皮肤免疫以保证毛囊正常生长,尤其是犊牛;Qa-1b纳米抗体可抑制B16细胞增殖和迁移,为增强皮肤免疫及抗黑素瘤发展的抗体药物提供理论依据.