摘要旨在探索骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)对绵羊卵巢颗粒细胞中间隙连接蛋白基因(gap junction protein alpha 1,GJA1)表达的影响及其分子调控机制.本研究利用廊坊市屠宰场收集的2～4岁健康绵羊卵巢分离颗粒细胞,采用免疫荧光染色技术定位GJA1在颗粒细胞中的分布.将细胞随机分为4组,分别添加0、10、50和100 ng·mL-1浓度的重组BMP4蛋白,每组3个重复,培养24 h,利用CCK-8法评估细胞活性,RT-qPCR和Western blot研究BMP4对GJ A1的mRNA和蛋白表达水平的影响.为探究BMP4调控GJA1表达的潜在机制,将细胞随机分为3组,每组3个重复,除对照组外分别添加10 μmol·L-1 BMP Ⅰ型受体抑制剂(Dorsomorphin)和干扰小 RNA 敲除 SMAD 家族蛋白 4(SMAD family member 4,SMAD4),均添加100 ng·mL-1 的 BMP4 处理细胞 24 h,RT-qPCR 检测 GJA1 和 SMAD4 表达量,Western blot 分析测定 GJA1 和SMAD4表达水平以及SMAD1/5/8的磷酸化水平,最后利用划痕染料示踪试验检测绵羊卵巢颗粒细胞之间的间隙连接活性.结果显示,BMP4显著抑制了绵羊卵巢颗粒细胞中GJA1表达和间隙连接活性(P＜0.05),此抑制效应在添加Dorsomorphin和敲除SMAD4后显著减弱(P＜0.05),同时,BMP4处理显著增加了 SMAD1/5/8的磷酸化水平(P＜0.05).综上,BMP4通过SMAD1/5/8-SMAD4信号转导调控GJA1表达进而影响颗粒细胞间隙连接活性,本结果增加了对绵羊BMP/SMAD通路调控颗粒细胞间隙连接活性的了解,为改进体外卵泡成熟方法和高繁母羊的分子育种提供了基础.