一株牛肠病毒F型的全基因组分析及抗体检测间接ELISA方法的建立

Full-genome Analysis of a Bovine Enterovirus Type F and the Establishment of an Indirect ELISA Method for Antibody Detection

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摘要本研究从牛肠病毒(BEV)阳性粪便中通过接种BHK细胞进行蚀斑纯化分离得到一株F型肠道病毒,经过RT-PCR鉴定正确后送生物公司进行全基因测序以及进行TCID50的测定,以MEGA11.0等生物信息学软件对BEV全基因进行分析并构建遗传进化树.以原核表达方式得到含BEV分离株VP3基因的重组蛋白,作为包被抗原,建立检测抗体的间接ELISA方法,并对建立的ELISA方法的特异性、灵敏性、重复性进行测定与用于临床样品的检测.结果显示,BEV分离株的TCID50为10-6.26·mL-1,病毒分离株全长为7 439 nt,ORF大小为6 504 bp,编码2 168个氨基酸,与F型肠道病毒BEV4遗传关系最近且核苷酸相似性最高,故分离到的病毒为F型肠道病毒,暂命名为BEV-QD,与其他F型毒株相比,BEV-QD株存在氨基酸的突变以及缺失并且大多集中在P2、P3区.本次建立的抗体检测间接ELISA方法重复性良好;阳性血清稀释1 600倍后结果仍呈现阳性,灵敏性良好;与BVDV等阳性血清不发生特异性结合,特异性良好;检测40份临床样品中,13份为阳性,阳性率为32.5％.本研究分离到一株F型牛肠病毒突变株,建立了一种抗体间接ELISA方法.为牛肠病毒的检测和防控提供了基础手段.