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猪CYP3A29基因核心启动子鉴定及转录调控分析

Identification and Transcriptional Regulation Analysis of the Core Promoter of Porcine CYP3A29 Gene

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摘要旨在鉴定猪CYP3A29基因核心启动子及相应的转录调控因子,分析转录因子对CYP3A29启动子活性的调控.本研究以3头健康的大白母猪(30 kg)为试验材料,利用PCR和Western blot检测CYP3A29基因在猪各组织(心、肝、脾、肺、肾、小肠、肌肉)中的表达分布;构建不同片段长度的CYP3A29基因启动子双荧光素酶报告载体,转染293T和AML12细胞系,检测荧光素酶活性,确定CYP3A29基因的核心启动子区域;利用Animal TFDB网站分析CYP3A29核心启动子区域可能存在的转录调控因子,针对核心启动子区域构建分段缺失双荧光素酶报告载体,检测荧光素酶活性大小,确定转录因子结合位点;构建转录因子结合突变位点的双荧光素酶报告载体和转录因子shRNA载体,探讨转录因子对CYP3A29核心启动子的调控作用.结果显示,CYP3A29基因在猪肝脏中表达量最高;CYP3A29启动子4个不同检测区域(-2 026～+62 bp、-1 526～+62 bp、-1 026～+62 bp和-528～+62 bp)中-528～+62 bp活性最高,为CYP3A29核心启动子区;CYP3A29启动子-528～-448 bp区域负向调控核心启动子活性,且含有潜在的转录因子RUNX1结合位点;突变RUNX1结合位点可显著降低-528～+62 bp启动子的荧光素酶活性,而干扰RUNX1基因则显著升高-528～+62 bp野生型启动子的荧光素酶活性,但对-528～+62 bp突变型启动子的荧光素酶活性无显著影响,提示RUNX1转录因子可负向调控CYP3A29基因核心启动子活性.本研究结果为进一步解析猪CYP3A29基因的转录调控机制奠定了基础.

作者王红 ^[1] 赵为民 ^[2] 程金花 ^[2] 李惠侠 ^[3] 方晓敏 ^[4] 学术成果认领

作者单位江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所,南京 210014;南京农业大学动物科技学院,南京 210095 ^[1] 江苏省农业科学院畜牧研究所,南京 210014 ^[2] 南京农业大学动物科技学院,南京 210095 ^[3] 江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所,南京 210014 ^[4]

关键词猪 CYP3A29 核心启动子 RUNX1 转录调控 porcine CYP3A29 core promoter RUNX1 transcription regulation

分类号 S828.2

栏目名称

遗传育种

DOI 10.11843/j.issn.0366-6964.2025.03.016

发布时间 2025-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

国家自然科学基金（31872338）江苏省种业振兴揭榜挂帅项目（JBGS(2021)103）