摘要本研究旨在探究大麻二酚(cannabidiol,CBD)通过BRD4/AMPK/mTOR信号通路缓解双酚A(bisphenol A,BPA)导致的猪肠上皮细胞(pig intestinal epithelial cells,IPEC-J2)的凋亡和自噬的作用机制.首先通过CCK-8法测定细胞活力,筛选出BPA对IPEC-J2细胞的半数抑制浓度和CBD对BPA的最适拮抗剂量.用分组比较方法,将试验分为空白对照组、BPA 组(150 μmol·L-1 BPA)、BPA+CBD 组(150 μmol·L-1 BPA+10 μmol·L-1 CBD)、BPA+CBD+CQ 组(150 μmol·L-1 BPA+10 μmol·L-1 CBD+20 μmol·L-1 CQ)和 CBD(10 μmol·L-1 CBD)组.通过AO/EB染色法以及流式细胞术检测IPEC-J2细胞的凋亡率;通过DCFH-DA法检测细胞中ROS水平;通过氧化应激试剂盒检测氧化应激水平;通过免疫荧光技术检测LC3-Ⅱ蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)来检测细胞凋亡、自噬、肠紧密连接蛋白和BRD4/AMPK/mTOR信号通路相关基因的表达水平.结果表明,经150 μmol·L-1 BPA处理,IPEC-J2细胞凋亡和自噬水平均升高,经10 μmol·L-1 CBD处理后,细胞凋亡和自噬水平均降低;CBD可以显著下调由BPA引起的ROS和MDA水平升高(P＜0.05),上调BPA引起的GSH-Px活性降低(P＜0.05);CBD可以显著下调由BPA引起的细胞凋亡相关基因(Bax 和 caspase-3)、细胞自噬相关基因(P62、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和 ATG5)和 BRD4/AMPK/mTOR 通路(AMPK)相关基因的表达水平升高(P＜0.05),上调BPA引起的LAMP1、Bcl-2、BRD4、mTOR、ZO-1和Claudin-1的表达水平降低(P＜0.05);免疫荧光结果表明,CBD可以显著降低由BPA所诱导的IPEC-J2细胞LC3-Ⅱ的表达与分布(P＜0.05).综上所述,CBD可以缓解BPA导致的IPEC-J2细胞氧化应激,进而通过BRD4/AMPK/mTOR信号通路拮抗BPA诱导的IPEC-J2细胞凋亡和自噬.